奥林巴斯显微镜冷冻技术的熟练运用

　　奥林巴斯显微镜在现代社会中的应用非常广泛，我们需要提高设备的使用效率，把设备的大功能发挥出来。操作人员需要掌握奥林巴斯显微镜的使用法则，提高显微镜的使用效率。而在使用的过程中，样品需要脱水，所脱掉的水份平均约占组织重量的三分之二，从取材到镜下观察，样品还要经过一系列的化学与物理因素的处理。因而建立了冷冻技术。那么奥林巴斯显微镜的冷冻技术到底如何，请随上海维翰一起走进奥林巴斯显微镜冷冻技术的世界。

　　奥林巴斯显微镜的冷冻技术不仅能解决某些常规方法不可避免的问题，揭示常规方法无法看到的一些结构细节，而且所得结果也可与常规方法的结果进行比较，显微镜检验后者的客观真实性。
　　其中冷冻技术所面临的一个共同间题是避免产生冰晶，特别是大的冰晶。这些冰晶一且产生，将会使细胞结构严重破坏。因此，要设法在冷冻过程中只产生很小的冰晶，奥林巴斯显微镜如果可能，好不产生冰晶，即使组织中的水份处在“玻璃态”。
　　奥林巴斯显微镜为达到冷冻这一目的，目前采取的措施有两个：
　　(1)速冻。尼康显微镜单纯使用速冻时，为了不产生冰晶，奥林巴斯显微镜组织的冷冻速度应达到一1000C/ (s·cm)或更快；
　　(2)使用冷冻保护剂，使用保护剂后，徕卡显微镜组织的冷冻速度可降至10- 1000C/(s·cm)，而不致产生大的冰晶。
　　样品经冷冻后，在真空中断裂，并制备裂面的复型，用于电镜观察的方法称为冷冻断裂。如果在制备复型前，奥林巴斯显微镜先加温样品，使裂面上的冰部份升华，则称为冷冻蚀刻。这两种方法的共同特点是可以在复型膜上奥林巴斯显微镜观察裂面的立体形象，此外，冷冻蚀刻还可以揭示细胞膜内外表面的二维结构。
　　固体升华为气体的方法，因无界面形成，奥林巴斯显微镜样便不会受表面张力损伤。
　　冷冻干燥的操作原则是取材后立即将样品放入液氮中，奥林巴斯显微镜然后将冷冻的样品移入真空装置(如真空喷涂仪)中，在低真空(10-Zt)中抽干。但当样品直接放入液氮中时，奥林巴斯显微镜样品周围往往有许多小泡(由于样品温度大大高于液氮，液氮在样品周围沸腾造成)，阻碍样品内部进一步冷却。
　　克服的办法是先把样品放入液态丙烯(一800C)、或液态乙烷(一800c)、甲烷(一480C)中冷冻后，奥林巴斯显微镜再转移至液氮中。80年代日人用有机溶剂干燥法，如用氟里昂TF或酒精冷冻干燥法等，奥林巴斯显微镜效果也很好。
　　以酒精冷冻干燥法为例，奥林巴斯显微镜简述操作程序：样品按普通扫描电镜标本制备方法进行固定和乙醇系列脱水，然后将其由100%乙醉移至100%乙醚中，再将样品投入装满液氮的高约5cm的金属杯中使之冷冻。把装有冷冻样品的金属杯放入真空装置中，用旋转泵抽气。
　　奥林巴斯显微镜由于在封闭空间体积不变的情况下，压力降低会引起温度下降，液氮变为固态氮并且升华。然后样品中的乙醉也升华，样品干燥。待金属杯温度回到室温后取出样品，乙睛急速蒸发时，就要冷却固化。利用这种性质很容易将样品干燥。乙睛另一性质是它可溶于水也可溶于乙醇.因此可以用乙腑干燥标品，其步骤如下：
　　样品按一般方法固定，用浓度递增的乙腑系列(50写-100%)脱水(每次脱水时间需20min )。用容徽约lml的铝制容器装满乙脯，把已脱水的样品放入。将该容器放入真空装置中。抽真空，奥林巴斯显微镜容器骤冷，乙睛成为固态。继续抽真空时乙睛升华、样品干燥。